မော်လီကျူးဇီဝဗေဒသုတေသနနည်းစနစ်များနှင့်၎င်းတို့၏အသုံးပြုမှု

မော်လီကျူးဇီဝဗေဒ သုတေသနနည်းလမ်းများကို ခေတ်သစ်ဆေးပညာ, မှုခင်းသိပ္ပံနှင့်ဇီဝဗေဒအတွက်အရေးပါသောအခန်းကဏ္ဍမှ။ DNA ကိုနှင့် RNA ၏လေ့လာမှုမှာတိုးတက်လာဖို့အတွက်ကျေးဇူးတင်ပါတယ်, လူတစ်ဦးစသည်တို့ကို, အက်ဆစ်အရောအနှောအတွက်အလိုရှိသော nucleic acid ကိုအသိအမှတ်မပြုရန်, အကြောင်းရင်းအေးဂျင့်ကိုဆုံးဖြတ်ရန်သက်ရှိများများ၏မျိုးရိုးဗီဇစူးစမ်းလေ့လာနိုင်

မော်လီကျူး-ဇီဝနည်းလမ်းများ။ ဒါဟာဘာလဲ?

ပြန်သိပ္ပံပညာရှင်များ၏ 70-80 အတွက် decipher မှပထမဦးဆုံးဖြစ်ခဲ့သည် လူ့မျိုးနွယ်၏မျိုးရိုးဗီဇ။ ဤဖြစ်ရပ်သည်မျိုးဗီဇအင်ဂျင်နီယာနှင့်မော်လီကျူးဇီဝဗေဒများ၏ဖွံ့ဖြိုးတိုးတက်ရေးကိုတွန်းအားကိုပေးတော်မူ၏။ DNA ကို၏ဂုဏ်သတ္တိများနှင့် RNA ၏လေ့လာမှုကရောဂါရောဂါ, လေ့လာမှုမျိုးဗီဇ၏ရည်ရွယ်ချက်ဤ nucleic အက်ဆစ်သုံးစွဲဖို့ယခုဖြစ်နိုင်သောကြောင်းအဓိပ်ပာခဲ့သညျ။

DNA ကိုနှင့် RNA ၏ပြင်ဆင်မှု

မော်လီကျူးဇီဝဗေဒ အဖြေရှာတဲ့နည်းလမ်းများ မကြာခဏဒီ: ပစ္စည်းကိုစတင်လိုအပ် nucleic acid ကို။ သက်ရှိများ၏ဆဲလ်ထံမှထိုအရာဝတ္ထုများကိုရွေးဖို့နည်းလမ်းများစွာရှိပါတယ်။ တစ်ခုချင်းစီကိုယင်း၏အားသာချက်များနှင့်အားနည်းချက်များကိုရှိပါတယ်, စင် form မှာ nucleic အက်ဆစ်သီးခြားတစ်ဦးနည်းလမ်းကိုရွေးချယ်တဲ့အခါသူကထည့်သွင်းစဉ်းစားရပါမည်။

Marmur အားဖြင့် DNA ကို၏ 1. အဘိတ်။ အဆိုပါနည်းလမ်းကိုစင်ကြယ်သော DNA ကိုရရှိလာတဲ့ခပြွီး, အရက်တ္ထုများ၏အရောအနှောကုသပါဝင်ပါသည်။ ဒီနည်းလမ်းရဲ့ကျဘက်ကိုတဖြည်းဖြည်းစားနိုင်ပြီးတ္ထုများ, ဖင်နိုလစ်နှင့် chloroform ၏အသုံးပြုမှုသည်။

အဆိုပါစန်းအပေါ် DNA ကို၏ 2. အထီးကျန်ထားခြင်း။ ဒီနေရာမှာအသုံးပြုခဲ့ကြောင်းအဓိကပစ္စည်းဥစ္စာ - guanidine thiocyanate (GuSCN) ဖြစ်ပါသည်။ ဒါဟာ၏အစစ်ခံအားပေးအားမြှောက် deoxyribonucleic acid ကြောင့်နောက်ပိုင်းတွင်အထူးကြားခံအားဖွငျ့ကောက်ယူနိုင်သည့်အနေဖြင့်အထူးပြုအလွှာ, ပေါ်မှာ။ သို့သော် GuSCN - ကို TCP တစ်ခု inhibitor ဖြစ်ပြီး, ကြောင့်ပင်သေးငယ်တဲ့အဘို့ကို DNA တွင်အပ်နှံရရှိ nucleic အက်ဆစ်နှင့်အတူအလုပ်လုပ်နေစဉ်အရေးကြီးသောသော polymerase ကွင်းဆက်တုံ့ပြန်မှု၏သင်တန်းကိုသြဇာလွှမ်းမိုးနိုင်။

အညစ်အကြေးများ၏ 3. မိုးရွာနိုင်။ အဆိုပါနည်းလမ်းမော်လီကျူးသူတို့ကိုယ်သူတို့ dehoksiribonukleinovoy အက်ဆစ်နှင့်အညစ်အကြေးအပ်နှံကြသည်မဟုတ်ကြောင်းယခင်သူတွေကိုထံမှကွဲပြားနေသည်။ ဒီလိုလုပ်ဖို့က, Ion Exchange ကိုအသုံးပြုပါ။ အဆိုပါအားနည်းချက်ကတော့အားလုံးမဟုတ်တ္ထုများအခြေချနိုငျသောကွောငျ့ဖွစျသညျ။

4. မစ္ဆားစိစစ်။ သင် DNA ကိုမော်လီကျူး၏ဖွဲ့စည်းမှုနှင့်အချို့သောစာရင်းဇယားရရှိရန်လိုအပ်ကြောင်းနှင့် ပတ်သက်. တိကျမှန်ကန်သတင်းအချက်အလက်ရှိသည်ဖို့မလိုအပ်ပါဘူးတဲ့အခါဒီနည်းလမ်းကိစ္စများတွင်အသုံးပြုသည်။ အဆိုပါအကြောင်းပြချက်ဆပ်ပြာ, အထူးသဖြင့်အယ်လကာလီကိုင်တွယ်အခါ nucleic acid ကိုဖွဲ့စည်းပုံပျက်စီးစေနိုင်သည်ဖြစ်ပါသည်။

သုတေသနနည်းလမ်းခွဲခြား

သုတေသနအားလုံးသည်မော်လီကျူး-ဇီဝနည်းလမ်းများသုံးအဓိကအုပ်စုများသို့ခွဲခြားထားတယ်:

(အင်ဇိုင်းတွေတစ်ဗဟုသုံးပြီး) 1. Amplification ။ အဆိုပါရောဂါရှာဖွေနည်းလမ်းများအများအပြားအတွက်အရေးပါသောအခန်းကဏ္ဍရာ polymerase ကွင်းဆက်တုံ့ပြန်မှု, - ဤ PCR ပါဝင်သည်။

2. Neamplifikatsionnye ။ နည်းလမ်းများ၏ဤအုပ်စုသည် nucleic acid ကိုရောနှော၏လုပျငနျးနှင့်တိုက်ရိုက်ဆက်စပ်နေပါတယ်။ ဥပမာ 3 မျိုးကိုချေဖြစ်ကြသည် situ Hybrid အတွက်, etc

တိကျတဲ့ DNA ကိုသို့မဟုတ် RNA စုံစမ်းစစ်ဆေးဖို့ချည်နှောင်သောစုံစမ်းစစ်ဆေးမော်လီကျူး, ကနေ signal ကို၏အသိအမှတ်ပြုမှုအပေါ်အခြေခံပြီး 3. နည်းလမ်းများ။ ဥပမာ - Hybrid စနစ်အ Hybrid Capture အ System ကိုဖြေရှင်းနည်း (hc2) ။

မော်လီကျူးဇီဝဗေဒသုတေသနနည်းစနစ်များများတွင်အသုံးပြုနိုင်အင်ဇိုင်းတွေ

အတော်များများကမော်လီကျူးရောဂါရှာဖွေနည်းစနစ်အင်ဇိုင်းတွေ၏ကျယ်ပြန့်အကွာအဝေး၏အသုံးပြုမှုကိုပါဝင်ပတ်သက်နေ။ အောက်တွင်အများဆုံးမကြာခဏအသုံးပြုကြသည်:

1. ကန့်သတ်အင်ဇိုင်း - လိုအပ်သောအစိတ်အပိုင်းများဖို့ DNA ကိုမော်လီကျူး "ဖြတ်" ။

2. DNA ကို polymerase - တစ်ဦးကို double-သောင်တင် deoxyribonucleic acid မော်လီကျူး synthesizes ။

3. ကို Reverse transcriptase (transcriptase reverse) - တစ်ဦး RNA template ကိုကနေ DNA ကို synthesize လေ့ရှိတယ်။

4. DNA ကို ligase - ဘေ့အကြား phosphodiester ခံရသောချည်နှောင်ခြင်းကြောင့်၏ဖွဲ့စည်းခြင်းအတွက်တာဝန်ရှိသည်။

5. exonuclease - ထို deoxyribonucleic acid မော်လီကျူး၏အဆုံးအပိုငျးကနေဘေ့ဖယ်ရှားပေးပါသည်။

PCR - DNA ကိုချဲ့ထွင်၏အခြေခံနည်းလမ်း

Polymerase ကွင်းဆက်တုံ့ပြန်မှု (PCR) ခေတ်သစ်မော်လီကျူးဇီဝဗေဒအတွက်အသုံးများဖြစ်ပါတယ်။ တစ်ခုတည်း DNA ကိုမော်လီကျူးမိတ္တူများစွာသောနံပါတ် (ချဲ့မော်လီကျူး) ရရှိသောနိုင်သည့်အတွက်ဤနည်းလမ်းကို။

PCR ၏အဓိကလုပ်ငန်းဆောင်တာ:

- ရောဂါရောဂါ;

- DNA ကိုအစိတ်အပိုင်းများပုံတူပွားခြင်း Gene ။

ကနဦးရဲ့ DNA မော်လီကျူးတစ်ခု thermostable DNA ကို polymerase (Taq သို့မဟုတ် Pfu), deoxyribonucleotide ဖော့စဖိတ် (နိုက်ထရိုဂျင်ဘေ့စ၏သတင်းရင်းမြစ်), အ primer (2 primer 1 DNA ကိုမော်လီကျူး) နှင့်သူ့ဟာသူလုပ်ဆောင်သွားရန်ဖြစ်နိုင်သည်သောကြားခံစနစ်က: အ polymerase ကွင်းဆက်တုံ့ပြန်မှုထွက်သယ်ဆောင်ရန်အောက်ပါဒြပ်စင်များလိုအပ်ပါတယ် အားလုံးတုံ့ပြန်မှု။

denaturation, primer annealing နှင့် elongated: PCR သုံးခြေလှမ်းများပါဝင်ပါသည်။

1. denaturation ။ 94-95 ဒီဂရီအပူချိန်မှာစင်တီဂရိတ် DNA ကို၏နှစ်ခုချည်နှောင်အကြားဟိုက်ဒရိုဂျင်ခံရသောချည်နှောင်ခြင်းကြောင့်ခြိုးဖကျြ proshodit နှင့်ရလဒ်အဖြစ်ကျနော်တို့နှစ်ဦးကို Single-သောင်တင်မော်လီကျူးရ။

2. primer annealed ။ 50-60 ဒီဂရီအပူချိန်မှာစင်တီဂရိတ်လုပ်ဆောင်မှုအမျိုးအစားအရသိရသည် Single-သောင်တင် nucleic acid ကိုမော်လီကျူးများစွန်းမှာနိုင်ရေး primer တွေ့ရှိနိုင်ပါသည်။

3. elongated ။ 72 ဒီဂရီအပူချိန်မှာသမီးကို double သောင်တင် deoxyribonucleic acid မော်လီကျူးများဖန်တီးနေသည်။

DNA ကိုအစီအစဉ်

မော်လီကျူးဇီဝဗေဒသုတေသနနည်းစနစ်များမကြာခဏ deoxyribonucleic acid ၏မော်လီကျူးအတွက်ဘေ့၏ sequence ကို၏အသိပညာလိုအပ်သည်။ အဆိုပါဆုံးဖြတ်ရန် မျိုးရိုးဗီဇကုဒ် sequenced ။ အနာဂတ်မှာ၏မော်လီကျူးရောဂါရှာဖွေရေးလူ့ sequence ကို၏ပြဌာန်းခွင့်အတွက်ရရှိခဲ့သည့်အသိပညာပေါ်တွင်အခြေခံလိမ့်မည်။

အစီအစဉ်၏အောက်ပါအမျိုးအစားများ:

• အဆိုပါ Maxam-Gilbert အားဖြင့်အစီအစဉ်;
• ဆန်းဂါးဆိုအစီအစဉ်;
• pyrosequencing;
• nanoporovoe အစီအစဉ်။